|
|
產(chǎn)品簡介
|
實(shí)驗(yàn)流程
|
該產(chǎn)品是經(jīng)過美基嚴(yán)格篩選和質(zhì)控的核酸提取核心原料。焦碳酸二乙酯是一種有效的核酸酶抑制劑,它能夠與很多酶的-NH,-SH或-OH等基團(tuán)發(fā)生反應(yīng),從而破壞酶的活性中心。實(shí)驗(yàn)表明,0.1%的DEPC可以徹底滅活濃度為0.5ug/ml RNase,更高含量的試劑可以添加至1% DEPC。提高DEPC濃度可以抑制更嚴(yán)重的RNase A污染, 不過溶液中DEPC殘留或DEPC副產(chǎn)物的高水平殘留會抑制很多酶促反應(yīng)或化學(xué)修飾RNA。已有文獻(xiàn)記載了RNA樣品中殘留的DEPC副產(chǎn)物會抑制體外翻譯反應(yīng)的情況。
進(jìn)行DEPC處理水制備時(shí),DEPC的用量不要超過0.1%,以防止抑制下游應(yīng)用。大多數(shù)來源于周圍環(huán)境或?qū)嶒?yàn)操作(例如使用了大量RNase的核糖核酸酶保護(hù)實(shí)驗(yàn)及質(zhì)粒制備等)的RNase污染來說,0.1%DEPC處理足夠。單獨(dú)進(jìn)行高壓滅菌也可以使RNase A失活,對于品質(zhì)良好的離心管和槍頭等一次性用品,單獨(dú)進(jìn)行高壓滅菌對于大部分應(yīng)用來說已經(jīng)足夠。由于高壓滅菌只能使部分RNase失活,若下游檢測敏感或污染來源不明,建議將一次性離心管或槍頭完全浸泡于超純水中,然后添加0.1% DEPC處理過夜再滅菌。
DEPC在水中的半衰期大約為30分鐘。高壓滅菌會使DEPC水解并釋放出反應(yīng)副產(chǎn)物CO2和乙醇,并產(chǎn)生輕微的乙醇?xì)馕痘?span>甜水果味,這是由副產(chǎn)物乙醇與微量的羧酸殘留結(jié)合形成揮發(fā)性酯類而造成的。對于DEPC濃度為0.1%的溶液進(jìn)行15~20分鐘的高壓滅菌后即可認(rèn)為不含DEPC。
|
|
|
提取流程
|
在不含Tris/MOPS/HEPES的試劑體系中,加入0.1% DEPC(本產(chǎn)品)然后于磁力攪拌器上攪拌過夜,最后進(jìn)行15~20分鐘的高壓滅菌。高壓滅菌后會殘留輕微的乙醇?xì)馕痘蛞环N甜水果味,這是由副產(chǎn)物乙醇與微量的羧酸殘留結(jié)合并形成揮發(fā)性酯類而造成的,這種氣味是正?,F(xiàn)象。滅菌后的產(chǎn)物最好低溫保存以防止微生物生長。
|
|
產(chǎn)品特性與優(yōu)點(diǎn)
|
-
無不可溶物
-
核酸提取試劑盒專項(xiàng)質(zhì)控
-
高純度>99%
-
經(jīng)本產(chǎn)品得到的DEPC處理水(氣味更少)
-
穩(wěn)定性強(qiáng)
|
|
產(chǎn)品參數(shù)
|
CAS號 |
1609-47-8 |
分子式 |
C6H10O5 |
分子量 |
162.14 |
純別 |
>99% |
級別 |
分子生物學(xué)級 |
性狀 |
無色透明液體 |
PCR抑制 |
不抑制(DEPC處理水) |
RNase去除效果 |
通過(0.5ug/ml RNase A溶液中添加0.1%DEPC處理1小時(shí) ) |
碳酸二乙酯 |
<1.0% |
砷鹽 |
≤0.0002% |
乙醇 |
≤0.2% |
灼燒殘?jiān)? |
<0.1% |
PCR抑制物 |
未檢出(DEPC處理水用于定量PCR) |
|