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産品簡介
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實驗流程
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該産品是(shì)經過美基嚴格篩選和(hé / huò)質控的(de)核酸提取核心原料。焦碳酸二乙酯是(shì)一(yī / yì /yí)種有效的(de)核酸酶抑制劑,它能夠與很多酶的(de)-NH,-SH或-OH等基團發生反應,從而(ér)破壞酶的(de)活性中心。實驗表明,0.1%的(de)DEPC可以(yǐ)徹底滅活濃度爲(wéi / wèi)0.5ug/ml RNase,更高含量的(de)試劑可以(yǐ)添加至1% DEPC。提高DEPC濃度可以(yǐ)抑制更嚴重的(de)RNase A污染, 不(bù)過溶液中DEPC殘留或DEPC副産物的(de)高水平殘留會抑制很多酶促反應或化學修飾RNA。已有文獻記載了(le/liǎo)RNA樣品中殘留的(de)DEPC副産物會抑制體外翻譯反應的(de)情況。
進行DEPC處理水制備時(shí),DEPC的(de)用量不(bù)要(yào / yāo)超過0.1%,以(yǐ)防止抑制下遊應用。大(dà)多數來(lái)源于(yú)周圍環境或實驗操作(例如使用了(le/liǎo)大(dà)量RNase的(de)核糖核酸酶保護實驗及質粒制備等)的(de)RNase污染來(lái)說(shuō),0.1%DEPC處理足夠。單獨進行高壓滅菌也(yě)可以(yǐ)使RNase A失活,對于(yú)品質良好的(de)離心管和(hé / huò)槍頭等一(yī / yì /yí)次性用品,單獨進行高壓滅菌對于(yú)大(dà)部分應用來(lái)說(shuō)已經足夠。由于(yú)高壓滅菌隻能使部分RNase失活,若下遊檢測敏感或污染來(lái)源不(bù)明,建議将一(yī / yì /yí)次性離心管或槍頭完全浸泡于(yú)超純水中,然後添加0.1% DEPC處理過夜再滅菌。
DEPC在(zài)水中的(de)半衰期大(dà)約爲(wéi / wèi)30分鍾。高壓滅菌會使DEPC水解并釋放出(chū)反應副産物CO2和(hé / huò)乙醇,并産生輕微的(de)乙醇氣味或甜水果味,這(zhè)是(shì)由副産物乙醇與微量的(de)羧酸殘留結合形成揮發性酯類而(ér)造成的(de)。對于(yú)DEPC濃度爲(wéi / wèi)0.1%的(de)溶液進行15~20分鍾的(de)高壓滅菌後即可認爲(wéi / wèi)不(bù)含DEPC。
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提取流程
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在(zài)不(bù)含Tris/MOPS/HEPES的(de)試劑體系中,加入0.1% DEPC(本産品)然後于(yú)磁力攪拌器上(shàng)攪拌過夜,最後進行15~20分鍾的(de)高壓滅菌。高壓滅菌後會殘留輕微的(de)乙醇氣味或一(yī / yì /yí)種甜水果味,這(zhè)是(shì)由副産物乙醇與微量的(de)羧酸殘留結合并形成揮發性酯類而(ér)造成的(de),這(zhè)種氣味是(shì)正常現象。滅菌後的(de)産物最好低溫保存以(yǐ)防止微生物生長。
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産品特性與優點
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無不(bù)可溶物
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核酸提取試劑盒專項質控
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高純度>99%
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經本産品得到(dào)的(de)DEPC處理水(氣味更少)
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穩定性強
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産品參數
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CAS号 |
1609-47-8 |
分子(zǐ)式 |
C6H10O5 |
分子(zǐ)量 |
162.14 |
純别 |
>99% |
級别 |
分子(zǐ)生物學級 |
性狀 |
無色透明液體 |
PCR抑制 |
不(bù)抑制(DEPC處理水) |
RNase去除效果 |
通過(0.5ug/ml RNase A溶液中添加0.1%DEPC處理1小時(shí) ) |
碳酸二乙酯 |
<1.0% |
砷鹽 |
≤0.0002% |
乙醇 |
≤0.2% |
灼燒殘渣 |
<0.1% |
PCR抑制物 |
未檢出(chū)(DEPC處理水用于(yú)定量PCR) |
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